Information sur les aliments nouveaux : Huile enrichie de DHA hautement raffinée dérivée du canola NS-B50027-4

Santé Canada a avisé Nuseed Americas qu'il n'avait aucune objection à l'utilisation alimentaire de l'huile hautement raffinée dérivée du canola NS-B5ØØ27-4. Le Ministère a effectué une évaluation exhaustive de cette variété de canola conformément à ses Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux. Ces lignes directrices sont fondées sur des principes reconnus à l'échelle internationale pour établir l'innocuité des aliments à caractères nouveaux.

Contexte

Le texte qui suit résume l'avis remis par Nuseed Americas ainsi que l'évaluation réalisée par Santé Canada. Il ne contient aucun renseignement commercial confidentiel.

1. Présentation

Nuseed Americas a mis au point une variété génétiquement modifiée de B. napus (canola) qui produit de l'acide docosohexaénoïque (DHA, C22:6 n-3) dans sa graine.

Pour obtenir ce caractère, sept gènes différents codant une enzyme, soit une désaturase, soit une élongase, ont été introduits dans le génome du canola. Lorsqu'elles sont exprimées ensemble, les sept nouvelles protéines constituent une voie de biosynthèse du DHA qui convertit l'acide oléique (AO) en DHA. Un huitième gène codant une phosphinothricine acétyltransférase (PAT) a été introduit comme marqueur pour la sélection de transformants efficaces en culture tissulaire.

L'évaluation de l'innocuité effectuée par les évaluateurs de la Direction des aliments a été réalisée conformément aux Lignes directrices pour l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux de Santé Canada. Ces dernières sont fondées sur les démarches visant l'harmonisation avec les directives établies par d'autres autorités réglementaires et reflètent les documents d'orientation internationaux dans ce domaine (p. ex., le Codex Alimentarius). L'évaluation a tenu compte de la façon dont cette variété de canola a été créée, de la composition et de la qualité nutritionnelle de cette variété par rapport aux variétés de canola non modifiées et de la possibilité que l'huile hautement raffinée dérivée de cette variété de canola soit toxique ou cause des réactions allergiques. Nuseed Americas a fourni des données qui démontrent que l'huile hautement raffinée dérivée du canola NS-B5ØØ27-4 est aussi salubre et de la même qualité nutritive que l'huile hautement raffinée dérivée de variétés de canola traditionnelles utilisées comme aliments au Canada.

La Direction des aliments est chargée par la loi de l'évaluation préalable à la mise en marché des aliments nouveaux et des ingrédients alimentaires nouveaux, comme le précise le Règlement sur les aliments et drogues (Titre B.28). La variété NS-B5ØØ27-4 est considérée comme un aliment nouveau dans la partie suivante de la définition des aliments nouveaux :

« c) aliment dérivé d'un végétal, d'un animal ou d'un micro-organisme qui, ayant été modifié génétiquement, selon le cas :

• (i) présente des caractères qui n'avaient pas été observés auparavant. »

2. Mise au point de la plante modifiée

Le pétitionnaire a fourni des renseignements décrivant les méthodes utilisées pour mettre au point le canola NS-B5ØØ27-4 et les données de biologie moléculaire qui caractérisent le changement génétique, lequel entraîne la production de l'acide gras DHA dans les graines de la plante.

Le canola NS-B5ØØ27-4 a été mis au point grâce à la transformation du cultivar de canola AV Jade par Agrobacterium à l'aide d'un vecteur binaire (pJP3416_GA7-ModB) contenant une construction (ADN-T) de sept gènes de microalgues et de levures (Micpu-Δ6D, codant une Δ6-désaturase; Pyrco-Δ5E, codant une Δ5-élongase; Pavsa-Δ5D, codant une Δ5-désaturase; Picpa-ω3D, codant une désaturase Δ15/ω3; Pavsa-Δ4D, codant une Δ4-désaturase; Lackl-Δ12D, codant une Δ12-désaturase; et Pyrco-Δ6E, codant une Δ6-élongase) dans la voie biosynthétique du DHA, ainsi qu'un gène marqueur de sélection (pat). L'expression des sept gènes de biosynthèse du DHA entraîne la conversion de l'AO en DHA dans le canola NS-B5ØØ27-4.

Les gènes utilisés pour la biosynthèse du DHA dans le canola NS-B5ØØ27-4 ont été synthétisés chimiquement à partir des séquences identifiées et caractérisées à l'origine à partir des organismes sources. Bien que la séquence d'ADN de chaque gène ait été modifiée de façon à ce que la séquence de codon (pourcentage G + C) ressemble au pourcentage G + C typique du canola, la séquence d'acides aminés de chaque protéine est inchangée. Aucun composant provenant des organismes sources n'a été directement utilisé dans la mise au point du canola NS-B5ØØ27-4.

Le pétitionnaire a fourni des renseignements à l'appui de la sécurité et de l'utilisation historique de chaque organisme source. (Micromonas pusilla, Micpu-Δ6D; Pyraminonas cordata, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E; Pavlova salina, Pavsa-Δ5D et Pavsa-Δ4D; Pichia pastoris, Picpa-ω3D; Lachancea kluyveri, Lackl-Δ12D; et Streptomyces viridochromogenes, PAT).

La protéine PAT dérivée de S. viridochromogenes a été fréquemment utilisée comme agent de sélection spécifique chez les organismes génétiquement modifiés et a déjà été évaluée chez de nombreux organismes, y compris un maïs de la lignée MZIR098 tolérant aux herbicides et résistant aux insectes (Santé Canada, 2016), un maïs de la lignée MZHG0JG tolérant aux herbicides (Santé Canada, 2016), un maïs tolérant aux herbicides MON 87419 (Santé Canada, 2016), un coton tolérant aux herbicides DAS-81910-7 (Santé Canada, 2015), un soya tolérant aux herbicides DAS-44406-6 (Santé Canada, 2013), un soya tolérant aux herbicides DAS-68416-4 (Santé Canada, 2012) et une betterave à sucre de la lignée T120-7 tolérante aux herbicides (Santé Canada, 2000).

3. Caractérisation de la plante modifiée

Le nombre de sites d'intégration de l'insert d'ADN-T dans le canola NS-B5ØØ27-4 a été caractérisé par un séquençage ciblé sur vecteur, basé sur Illumina, de deux lignées T3 et de six lignées T4. D'après les résultats de cette analyse de séquençage du génome entier (SGE), deux sites d'intégration de l'ADN-T ont été décelés, le premier sur le chromosome A02 et le second sur le chromosome A05 du génome du canola NS-B5ØØ27-4. Le séquençage Sanger a permis de confirmer la position des deux inserts d'ADN-T. Avec le procédé de séquençage ciblé sur vecteur, l'absence de séquence de squelette vectoriel dans le canola NS-B5ØØ27-4 a été confirmée.

L'intégrité et les séquences génomiques de canola adjacentes des inserts d'ADN-T A02 et A05 ont été davantage caractérisées grâce à l'analyse SGE de deux lignées contenant seulement l'insert d'ADN-T A05, et d'une lignée contenant uniquement l'insert d'ADN-T A02. De plus, le séquençage d'amplicons PCR (SAP) d'une lignée T5 a été effectué.

Le SGE et le SAP ont confirmé que l'insert d'ADN-T A02 avait un insert partiel de la construction provenant du vecteur de transformation pJP3416_GA7-ModB, contenant les cassettes d'expression complètes des gènes Micpu-Δ6D, Pyrco-Δ5E, Pavsa-Δ5D et Picpa-ω3D. Une séquence résiduelle de bord droit (right border) de 43 pb a été observée en amont de l'ADN-T. La séquence de l'insert d'ADN-T A02 correspond parfaitement à la séquence de référence vectorielle de pJP3416_GA7-ModB; par conséquent, aucune variation des acides aminés (AA) n'a été observée dans les séquences protéiques des quatre gènes par rapport à leurs références. Étant donné que les quatre gènes de l'insert d'ADN-T A02 ont toujours leurs propres cassettes d'expression complètes, l'expression des quatre gènes n'est pas altérée.

Le SGE et le SAP ont confirmé que l'insert d'ADN-T A05 avait deux ensembles de la construction provenant du vecteur de transformation pJP3416_GA7-ModB. Les deux ensembles étaient reliés par une séquence palindromique de bord gauche (left border) de 156 pb et flanqués de 40 pb de séquence de bord droit (right border) en amont et de 42 pb de séquence de bord droit en aval. Les deux ensembles formaient une structure palindromique avec orientation RB-LB:LB-RB.

La séquence de l'insert d'ADN T A05 correspondait parfaitement à la séquence de référence vectorielle de pJP3416_GA7-ModB, et aucune variation des AA n'a donc été observée dans les séquences protéiques des huit gènes par rapport à leurs références. Étant donné que les deux ensembles avaient toujours leurs propres cassettes d'expression complètes, la présence de la structure palindromique n'affecte pas l'expression des gènes. Cette observation est également étayée par le pourcentage constant de DHA mesuré dans les lignées transgéniques ayant des antécédents différents et dans des environnements différents.

L'insert d'ADN-T A02 a remplacé une séquence de 15 pb à partir de la région 3′ UTR d'un gène de protéine putative hypothétique (PPH) de fonction inconnue. Le gène de PPH a été localisé sur la molécule chrUn-random du génome de référence de B. napus et sur le chromosome A02 du génome de référence de B. rapa. L'insert d'ADN-T A05 a remplacé une séquence de 20 pb dans le 2^e exon du gène de type Pto-Interacting (PTI). Le gène de type PTI et la séquence de 20 pb remplacée se trouvaient sur le chromosome A05 du génome de référence de B. napus. La protéine PTI est une kinase de sérine-thréonine intervenant dans la cascade de signalisation médiée par la réaction d'hypersensibilité (HR). La fonction de la protéine de type PTI du canola n'est pas caractérisée. D'après l'analyse de la composition du canola NS-B5ØØ27-4, ni l'insertion de l'ADN-T A02 ni celle de l'ADN-T A05 n'ont entraîné d'effets nocifs à un niveau phénotypique.

On a effectué des analyses bioinformatiques pour étudier la toxicité et l'allergénicité éventuelles des protéines potentiellement exprimées identifiées comme cadres de lecture ouverts (ORF) aux jonctions d'ADN individuelles des inserts d'ADN-T A02 et A05. Les séquences d'ORF potentiels ont été déterminées par la traduction prédite par ordinateur de l'ADN chevauchant les jonctions aux sites d'insertion de l'ADN-T entre l'ADNg du canola et les inserts d'ADN-T pour chaque site d'insertion. ainsi que le segment joint des deux séquences palindromiques de l'insert dans le chromosome A05. Les ORF potentiels ont été définis comme une longueur de séquence allant d'un codon d'arrêt au codon d'arrêt suivant dans les régions qui chevauchent les jonctions d'ADN. Ces ORF potentiels ont été traduits et évalués pour déterminer s'il y avait correspondance d'identité entre la séquence et des toxines et allergènes connus et, le cas échéant, s'il y avait lieu d'effectuer d'autres tests d'innocuité. Aucune des analyses bioinformatiques n'a donné de résultat permettant de soupçonner que les protéines putatives sont toxinogènes ou allergènes.

Huit analyses KASP basées sur la réaction en chaîne de la polymérase (PCR) et spécifiques aux allèles, qui ciblaient les quatre jonctions d'ADN (deux analyses/jonction) des deux inserts d'ADN-T, ont été élaborées pour étudier la stabilité génétique et la transmission des caractères de chaque insert dans le canola NS-B5ØØ27-4 sur plusieurs générations. KASP (Kompetitive Allele-Specific PCR) est une technologie de génotypage appartenant à LGC Limited (dont le siège social est au Royaume-Uni). KASP consiste en une analyse homogène basée sur la fluorescence (FRET) qui permet une discrimination bi-allélique précise des polymorphismes d'un seul nucléotide (PSN) et des insertions/délétions (indels) connus. La méthode KASP utilise trois composantes : test de l'ADN à l'aide du PSN (ou des indels) d'intérêt, le mélange d'analyse KASP contenant deux amorces avant différentes, spécifiques aux allèles et dotées de séquences terminales uniques et une amorce inversée et le Master Mix KASP contenant la cassette FRET plus la polymérase Taq dans une solution tampon optimisée.

Les résultats des analyses KASP indiquent la grande stabilité génétique des deux inserts d'ADN-T sur plusieurs générations de canola NS-B5ØØ27-4.

Six populations F2 et six populations BC1F2 ont été utilisées pour étudier la transmission des caractères des deux inserts d'ADN-T dans le canola NS-B5ØØ27-4 dans des contextes génétiques différents (lignées d'élite). La totalité des 12 populations F2 agissaient en ségrégation pour les deux inserts d'ADN-T. Les populations ont été génotypées avec des analyses KASP ciblant les deux inserts. On a utilisé le test du chi carré (χ²) pour analyser les données de ségrégation pour les 12 populations F2. L'analyse a confirmé que les deux inserts ont été transmis de façon stable sur des populations et dans des contextes différents selon les principes de la génétique mendélienne.

4. Information sur le produit

Le canola NS-B5ØØ27-4 diffère de ses homologues traditionnels par l'ajout de huit gènes : Micpu-Δ6D, codant une Δ6-désaturase; Pyrco-Δ5E, codant une Δ5-élongase; Pavsa-Δ5D, codant une Δ5-désaturase; Picpa-ω3D, codant une Δ15-/ω3-désaturase; Pavsa-Δ4D, codant une Δ4-désaturase; Lackl-Δ12D, codant une Δ12-désaturase; et Pyrco-Δ6E, codant une Δ6-élongase et d'un gène marqueur de sélection (pat), codant une protéine phosphinothricine acétyltransférase (PAT). Les produits d'expression des sept premiers gènes composent une voie de biosynthèse du DHA par laquelle l'AO est converti en DHA. La protéine PAT a été utilisée pour sélectionner des transformants efficaces contenant l'insert d'ADN T dans la culture tissulaire.

L'expression protéique des sept enzymes de biosynthèse du DHA a été quantifiée dans différents tissus au cours du cycle de vie du canola NS-B5ØØ27-4. La quantification a été réalisée au moyen de la spectrométrie de masse couplée à la chromatographie en phase liquide avec détection de réactions multiples (SM-CPL-DRM) hautement sensible. Les temps d'échantillonnage représentent des stades de croissance précis du canola, ce qui permet d'analyser divers types de tissus, y compris les feuilles, les racines, les gousses et les tissus reproducteurs.

La quantification SM-CPL-DRM a confirmé qu'aucune des nouvelles protéines n'a été détectée dans 250 µg d'extraits protéiques totaux de canola WT, y compris les sept points d'échantillonnage à cinq stades de croissance, sur deux sites d'essai sur le terrain. De plus, aucune des protéines n'a été détectée dans les extraits protéiques totaux dans les tissus du canola NS-B5ØØ27-4 autres que les semences, à partir des sept points d'échantillonnage à cinq stades de croissance, sur deux sites d'essai sur le terrain. Cependant, les sept protéines de la voie de biosynthèse du DHA ont été détectées dans des semences en développement et/ou matures de canola NS-B5ØØ27-4.

La protéine Pyrco-Δ5E se trouvait en-dessous de la limite de détection (LD) dans les semences en développement, tandis que la protéine Pyrco-Δ6E était sous la LD dans les semences matures. La protéine Pavsa-Δ4D est celle qui a été détectée avec la plus grande abondance parmi les sept protéines, atteignant 1 500 femtomoles dans les graines matures. Selon la masse moléculaire de chaque protéine, la concentration de chaque protéine transgénique a été déterminée (par mg de protéines). La concentration la plus faible était de 20 ng par mg de protéines totales pour la Pyrco-Δ5E, et la plus élevée était de 740 ng par mg de protéines totales pour la Pavsa-Δ4D.

L'expression de la protéine PAT en faible concentration a été confirmée dans le canola NS-B5ØØ27-4 à l'aide du procédé SM-CPL-DRM, où une trace de protéine PAT a été détectée dans tous les tissus testés du canola. L'expression de la PAT en faible quantité dans le canola NS-B5ØØ27-4 a également été appuyée par le transfert Western réalisé avec un anticorps anti-PAT. Aucune bande spécifique évidente n'a été détectée dans le canola de type sauvage (WT) ou NS-B5ØØ27-4, la plante entière de la variété BBCH15, la plante entière de la variété BBCH335 et la semence en développement de la variété BBCH79, ce qui laisse entendre que le niveau d'expression de la PAT est inférieur à la LD.

5. Exposition alimentaire

Le canola NS-B5ØØ27-4 fournira une autre source de DHA pour les marchés existants. Selon le pétitionnaire, le DHA du canola NS-B5ØØ27-4 sera offert sous forme d'huile hautement raffinée.

6. Nutrition

Des données sur la composition du canola NS-B5ØØ27-4, de sa variété parentale AV Jade et de sept autres variétés de référence commerciales ont été recueillies dans le cadre de huit essais au champ menés en 2015 dans les principales régions productrices de canola en Australie. Dans chaque essai, cinq répliques de chaque entrée ont été plantées suivant un schéma de bloc aléatoire complet. Le pétitionnaire affirme qu'à chaque site, la plantation et la culture ont été effectuées selon les pratiques agronomiques locales.

On a prélevé et analysé des échantillons de semences pour y déceler la présence des éléments suivants : protéines, matières grasses, fibres au détergent acide (FDA), fibres au détergent neutre (FCN), fibres brutes, cendres, acides gras, acides aminés, minéraux, vitamines, tocophérols/stérols et anti-nutriments (glucosinolates, acide phytique et composés phénoliques). Ces composants nutritionnels sont conformes aux recommandations énumérées dans le document consensuel de l'Organisation de coopération et de développement économiques (OCDE) sur les considérations relatives à la composition des nouvelles variétés de colza (canola) à faible teneur en acide érucique (OCDE, 2011). Les analyses de chaque composant ont été effectuées sur tous les échantillons par un seul laboratoire à l'aide de méthodes d'analyse approuvées et validées à l'échelle internationale et selon des procédures uniformes et appropriées d'entreposage et de préparation des échantillons.

Les données recueillies dans le cadre des essais sur le terrain ont été analysées à l'aide d'une méthodologie appropriée sur le plan statistique. Les données ont été résumées et la moyenne, le minimum, le maximum et l'écart-type ont été fournis. Lorsqu'on a relevé une différence statistiquement significative (valeur P < 0,05), on a recueilli d'autres éléments du contexte pour l'interprétation de la signification nutritionnelle possible de la différence par des comparaisons de la moyenne avec la plage de valeurs pour chaque analysat des variétés commerciales.

Dans le canola NS-B5ØØ27-4, sept désaturases et élongases d'acides gras ont été introduites pour convertir l'acide oléique en DHA. Comme il avait été prévu, le profil des acides gras a été modifié, de sorte qu'on a retrouvé des acides gras qui ne se trouvent pas normalement dans le canola traditionnel. Le recours au schéma expérimental des parcelles côte à côte a permis d'observer de faibles niveaux de DHA dans les variétés parentales et de référence.

En outre, on a relevé des différences statistiques dans l'acide oléique C18:1 n-9 (réduit de 26 %), l'acide linoléique C18:2 n-6 (réduit de 56 %) et l'acide alpha-linolénique C18:3 n-3 (augmenté de 88 %). Ces différences dans le profil des acides gras du canola NS-B5ØØ27-4 par rapport au témoin parental sont compatibles avec la modification de la voie de synthèse des acides gras pour lui faire produire du DHA.

D'autres changements statistiquement significatifs dans les acides gras du canola NS-B5ØØ27-4 par rapport au témoin ont été observés : Acide palmitique C16:0 (augmenté de 4,5 %), palmitoléique C16:1 n-9 (augmenté de 55 %), acide heptadécanoïque (margarique) C17:0 (augmenté de 4,3 %), acide heptadécénoïque C17:1 (réduit de 25 %), acide cis-vaccénique C18:1 n-7 (augmenté de 7,2 %), acide arachidique C20:0 (augmenté de 24 %), acide gadoléique (eicosénoïque) C20:n-9 (augmenté de 25 %), acide eicosadiénoïque C20:2 n-6 (augmenté de 52 %), acide béhénique C22:0 (augmenté de 34 %), acide nervonique C24:1 n-9 (réduit de 39 %). En plus des concentrations individuelles d'acides gras, on a relevé des différences notables sur le plan statistique dans plusieurs groupes d'acides gras, y compris le total C16:1 (augmenté de 10 %), le total C18:1 (réduit de 25 %, le total 18:2 (réduit de 55 %), le total 18:3 (augmenté de 97 %) et le total C24:1 (réduit de 39 %). Bien que statistiquement différentes, toutes les valeurs moyennes se situaient dans les plages de référence, ou les différences n'étaient pas importantes sur le plan nutritionnel, car elles ne sont pas associées à des intermédiaires dans la voie du DHA. Aucune différence statistiquement significative n'a été observée pour l'acide myristique C14:0, l'acide palmitoléique C16:1 n-7, l'acide stéarique C18:0 et l'acide lignocérique C24:0.

Fait intéressant, la teneur totale en acides gras du canola NS-B5ØØ27-4 était de 9 % inférieure à celle du témoin parental. Cela correspond à la réduction observée de la matière grasse brute, mais les concentrations n'étaient pas en dehors des plages de référence. Les graines de canola NS-B5ØØ27-4 présentaient également des teneurs en acides gras trans totaux plus élevées que les lignées témoin et les autres lignées commerciales de canola non génétiquement modifié. Bien que plus élevée, la teneur totale en gras trans était inférieure à 1 %. Ce résultat n'a pas été considéré comme important sur le plan nutritionnel, car les acides gras trans totaux sont présents à des concentrations semblables dans d'autres huiles végétales raffinées provenant de végétaux non génétiquement modifiés, y compris le soya et le tournesol.

On a relevé des différences statistiques dans les moyennes de plusieurs analysats non liés aux acides gras; toutefois, les moyennes se situaient dans les plages de référence associées aux variétés commerciales, à l'exception du δ-5-avenastérol. Une revue sommaire de la littérature n'a pas révélé de préoccupations nutritionnelles évidentes concernant ce phytostérol en particulier. De plus, la concentration totale de phytostérol dans le canola NS-B5ØØ27-4 était légèrement plus élevée, mais elle se situait dans les plages de référence et n'a pas été jugée importante sur le plan nutritionnel.

Le Bureau des sciences de la nutrition (BNS) a examiné divers scénarios pour estimer l'apport alimentaire en DHA du canola NS-B5ØØ27-4. Les données du cycle 2.2 de l'Enquête sur la santé dans les collectivités canadiennes. sur la nutrition (Santé Canada, 2015)^{Note de bas de page 1} ont été utilisées pour estimer le pire scénario (mangeurs seulement, 95^e percentile) et, en supposant que le canola NS-B5ØØ27-4 remplace toute l'huile végétale dans le régime alimentaire canadien, l'apport alimentaire estimé était inférieur à l'apport de référence de 3 g/jour recommandé dans le document provisoire du DF intitulé « Réévaluation de la position du DF sur l'apport de référence pour l'ajout d'huiles riches en EPA/DHA aux aliments dans le cadre du processus de notification des aliments nouveaux (Titre 28) ». Il est peu probable que la consommation de canola NS-B5ØØ27-4 pose un problème nutritionnel.

En ce qui concerne les allégations relatives à la santé, le canola NS-B5ØØ27-4 et l'huile hautement raffinée dérivée du canola NS-B5ØØ27-4 seraient admissibles aux allégations concernant le remplacement des gras saturés par des gras mono- et poly-insaturés et la baisse du taux de cholestérol dans le sang.

La Division de l'évaluation préalable à la mise en marché en matière de nutrition n'a aucune préoccupation relative à l'innocuité concernant le canola NS-B5ØØ27-4 du point de vue nutritionnel.

7. Chimie et toxicologie

La Section de l'évaluation toxicologique préalable à la mise en marché (SETPMM) a évalué l'innocuité du canola NS-B5ØØ27-4 en estimant la toxicité potentielle et l'allergénicité du produit fini, qui est l'huile de graines hautement raffinée.

Bien que le pétitionnaire ait fourni une preuve d'exposition accidentelle à L. kluyveri sur les surfaces de certains fromages (p. ex., Rokpol) et de l'utilisation de P. pastoris dans la préparation de produits pharmaceutiques injectables aux États-Unis. (p. ex., inhibiteur de la kallikréine utilisé dans le traitement de l'angioœdème héréditaire), aucun antécédent d'exposition alimentaire sécuritaire n'a pu être fourni pour les organismes donneurs (microalgues M. pusilla, P. salina et P. cordata).

Le niveau d'expression de chaque protéine a été déterminé dans la graine de canola NS-B5ØØ27-4 à l'aide de la technique SM-CPL-DRM. Les niveaux d'expression des protéines variaient de 20 à 740 ng/mg de protéines totales dans les semences en développement et matures de canola cultivées à deux endroits.

L'expression nouvelle de la protéine PAT dérivée de S. viridochromogenes a déjà été approuvée par Santé Canada pour diverses variétés de cultures destinées à la consommation humaine. L'innocuité de la protéine PAT de S. viridochromogenes est bien établie et ne nécessite donc pas de réévaluation dans la présente soumission. Le Bureau des dangers microbiens (BDM) a confirmé l'équivalence de cette séquence de la PAT avec les cultures génétiquement modifiées déjà approuvées.

La séquence d'acides aminés prédite de Lackl-Δ12D, Micpu-Δ6D, Pavsa-Δ4D, Pavsa-Δ5D, Picpa-ω3D, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E a été comparée aux séquences de toxines connues extraites de la base de données NCBI Entrez Protein (date de l'étude : 19 décembre 2016; seuil du score E variant de 0,23 à 4e-36). Le pétitionnaire n'a signalé que les trois principaux alignements de séquence du score E pour chacune des huit protéines introduites dans le canola. Il a été démontré que les alignements partageaient une identité de séquence de 22 à 42 % sur une zone qui allait de 41acides aminés à la longueur de la protéine. Le pétitionnaire a déclaré qu'aucun de ces appariements ne s'était produit avec des protéines reconnues comme étant « toxiques » ou des « toxines ». Il a été conclu que Lackl-Δ12D, Micpu-Δ6D, Pavsa-Δ4D, Pavsa-Δ5D, Picpa-ω3D, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E ne partagent pas de similarité de séquence avec les toxines orales connues.

Le pétitionnaire a déclaré que le canola NS-B5ØØ27-4 ne sera utilisé que pour la production d'huile de canola hautement raffinée à des fins alimentaires. Le pétitionnaire a fourni des données montrant que l'huile de canola NS-B5ØØ27-4 (huile Aquaterra^MC et Nutriterra^MC DHA), tout comme les autres huiles végétales hautement transformées, est dépourvue de toutes les protéines, y compris les huit protéines transgéniques évaluées dans la présente pétition.

La SETPMM a conclu que les protéines Lackl-Δ12D, Micpu-Δ6D, Pavsa-Δ4D, Pavsa-Δ5D, Picpa-ω3D, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E exprimées dans le canola NS-B5ØØ27-4 ne devraient pas poser de préoccupations toxicologiques pour les consommateurs, car elles seront absentes de l'huile finale hautement raffinée. Si le pétitionnaire demandait des utilisations alimentaires supplémentaires pour le canola NS-B5ØØ27-4 qui contient ses protéines, une évaluation plus poussée serait nécessaire pour combler les lacunes dans la base de données toxicologiques pour ces protéines.

D'après les données toxicologiques disponibles, l'utilisation d'huile hautement raffinée dérivée du canola NS-B5ØØ27-4 ne pose aucun problème sur le plan de l'innocuité des aliments. Par conséquent, la SETPMM n'a aucune préoccupation en matière de sécurité du point de vue toxicologique.

Le pétitionnaire a effectué une analyse bioinformatique en se servant de la séquence prévue d'acides aminés des protéines Lackl-Δ12D, Micpu-Δ6D, Pavsa-Δ4D, Pavsa-Δ5D, Picpa-ω3D, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E et l'a comparée à des séquences d'allergènes connues extraites de la base de données AllergenOnline. (Version 16; 1956 séquences). Les protéines ne partageaient pas une identité d'acides aminés supérieure à 35 % avec un allergène connu et ne contenaient pas d'épitopes d'allergènes potentiels (une correspondance exacte de huit séquences sur 8 acides aminés). D'après les résultats de l'analyse bioinformatique, on a conclu que Lackl-Δ12D, Micpu-Δ6D, Pavsa-Δ4D, Pavsa-Δ5D, Picpa-ω3D, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E ne correspondaient pas à des allergènes connus.

Le pétitionnaire a également effectué un alignement à l'aide de l'outil BLAST des séquences prévues d'acides aminés avec des allergènes connus et putatifs de la base de données NCBI Entrez Protein (19 décembre 2016) en utilisant les mots-clés « allergène » et « allergie ». Lorsque les protéines présentaient une identité de séquence d'au moins 50 %, ce résultat était considéré comme une correspondance positive. Le pétitionnaire a déclaré qu'il n'y avait pas de correspondance significative entre les protéines transgéniques et les allergènes connus ou putatifs.

Le pétitionnaire a démontré que les protéines Lackl-Δ12D, Micpu-Δ6D, Pavsa-Δ4D, Pavsa-Δ5D, Picpa-ω3D, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E, dérivées d'un système d'expression de lignées de cellules d'insectes, étaient dégradées lorsqu'elles étaient incubées à une température de 95 °C pendant 30 minutes (tel que déterminé par le test Western). Les auteurs ont signalé que moins de 36 % de la protéine Lack1-Δ12D et moins de 15 % de toutes les autres protéines restaient après le chauffage, ce qui démontre que les huit protéines transgéniques sont structuralement instables à des températures élevées.

La tranformation du canola et le raffinage de l'huile s'effectuent généralement à des températures élevées proches (entre 80 et 105 °C pendant 15 à 20 minutes). On s'attend à ce que les protéines dénaturées ou dégradées soient plus sensibles à la digestion dans le tractus gastro-intestinal.

Le pétitionnaire a démontré que les protéines Lackl-Δ12D, Micpu-Δ6D, Pavsa-Δ4D, Pavsa-Δ5D, Picpa-ω3D, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E, dérivées des systèmes d'expression de lignées d'E. coli ou de cellules d'insectes, étaient digérées en petits fragments protéiques (jusqu'à 18 acides aminés de longueur) après incubation avec un liquide gastrique simulé (LGS; 75 µg de pepsine; pH 1,2; incubé à 37 °C) pendant 60 minutes, respectivement, comme on l'a déterminé à l'aide de la technique CPL-SM/SM (chromatographie en phase liquide-spectrométrie de masse en tandem). Par conséquent, les protéines Lackl-Δ12D, Micpu-Δ6D, Pavsa-Δ4D, Pavsa-Δ5D, Picpa-ω3D, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E devraient être digérées en petits fragments dans les conditions normalement présentes dans l'estomac.

La SETPMM a conclu que les protéines Lackl-Δ12D, Micpu-Δ6D, Pavsa-Δ4D, Pavsa-Δ5D, Picpa-ω3D, Pyrco-Δ5E et Pyrco-Δ6E exprimées dans le canola NS-B5ØØ27-4 ne devraient pas poser de préoccupations relatives à l'allergénicité pour les consommateurs, car elles seront absentes de l'huile finale hautement raffinée.

D'après les renseignements fournis, l'utilisation d'huile hautement raffinée dérivée du canola NS-B5ØØ27-4 ne devrait pas non plus poser de problème d'allergénicité. Par conséquent, la SETPMM n'a aucune préoccupation en matière d'innocuité du point de vue des allergènes.

Conclusion

L'examen par Santé Canada des renseignements présentés à l'appui de l'utilisation aux fins alimentaires de l'huile hautement raffinée dérivée du canola NS-B5ØØ27-4 ne soulève pas de préoccupations liées à l'innocuité des aliments. Santé Canada est d'avis que l'huile hautement raffinée dérivée de cette variété de canola est aussi sûre et nutritive que l'huile hautement raffinée dérivée des variétés commerciales actuelles de canola.

Comme la composition nutritionnelle de l'huile hautement raffinée dérivée du canola NS-B5ØØ27-4 a considérablement changé, un étiquetage spécial est requis pour ce produit. On a conseillé au pétitionnaire de communiquer avec l'Agence canadienne d'inspection des aliments (ACIA) pour qu'elle examine la dénomination commune et l'étiquetage proposés du pétitionnaire pour ce produit à des fins de vente.

L'opinion de Santé Canada porte uniquement sur l'utilisation du canola NS-B5ØØ27-4 à des fins alimentaires. Les questions liées à son utilisation comme aliment pour animaux ont été traitées séparément dans le cadre des processus réglementaires existants de l'ACIA.

Le présent document d'information sur les aliments nouveaux a été préparé pour résumer l'avis concernant le produit en question fourni par la Direction des aliments, Direction générale des produits de santé et des aliments de Santé Canada. Cet avis est fondé sur l'examen exhaustif des renseignements soumis par le pétitionnaire conformément aux Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux.

(Also available in English)

Pour de plus amples renseignements, veuillez communiquer avec :

Section des aliments nouveaux
Direction des aliments
Direction générale des produits de santé et des aliments
Santé Canada, PL2204A1
251, promenade Frederick Banting
Ottawa (Ontario) K1A 0K9
hc.bmh-bdm.sc@canada.ca