ARCHIVÉE - Programme de surveillance des gras trans

Procédure et méthode de laboratoire

La méthode employée par le Programme de surveillance des gras trans pour l'analyse de la teneur en acides gras trans et en acides gras saturés des échantillons recueillis est la méthode officielle 996.06 de l'Association of Official Analytical Chemists (AOAC) (1). Il s'agit de la méthode recommandée pour la mesure des gras totaux et des acides gras dans divers aliments conformément à la réglementation actuelle en matière d'étiquetage nutritionnel tant au Canada qu'aux États-Unis. Cette méthode a été validée grâce à une étude internationale menée en collaboration.

Commentaires sur la méthode

Extraction des graisses

Les graisses des échantillons ont été extraites conformément à la méthode officielle 996.06 de l'AOAC (1). Cette méthode comporte l'ajout d'un étalon de chromatographie en phase gazeuse (CPG) convenable sous forme de triglycéride (TG) (p. ex. 13:0 TG, 17:0 TG ou 21:0 TG), la libération des graisses de la matrice alimentaire par hydrolyse acide ou basique, l'extraction des graisses libérées au moyen de diéthyl-éther/hexane et la transestérification des graisses en esters méthyliques d'acides gras (EMAG) à l'aide de BF3-MeOH.

Analyse des EMAG par CPG

L'analyse des EMAG a été réalisée par CPG capillaire conformément à la méthode officielle Ce 1h-05 de l'American Oil Chemists' Society (AOCS) (2). L'analyse par CPG a été effectuée au moyen d'une colonne capillaire SP-2560 de 100 mètres. La température du four était de 180^oC et a été maintenue constante (isothermie). Le gaz porteur utilisé était de l'hydrogène ou de l'hélium ultrapur à débit constant de 1,0 mL/min. La température de l'injecteur et du détecteur était de 250^oC. Ces conditions de CPG ont permis une excellente séparation de tous les EMAG et une séparation minimale des isomères 18:1 cis et trans.

Les pics des EMAG sur le chromatogramme ont été identifiés par comparaison avec les chromatogrammes publiés (1-5) ainsi qu'avec des mélanges d'étalons de référence d'EMAG tels que Supelco 37, Alltech K110, isomère cis/trans positionnel Matreya no 1131, Nu-Chek GLC-463 ou l'échantillon d'huile de soja partiellement hydrogénée no 5 de l'AOCS. L'identification de certains des isomères trans a de plus été confirmée par comparaison avec les étalons d'EMAG suivants : 6t-18:1, 7t-18:1, 9t-18:1, 11t-18:1, 12t-18:1, 13t-18:1, 15t-18:1, 9t,12t-18:2, 9c,12t-18:2 et 9t,12c-18:2 (Sigma, St. Louis, MO).

Mesure

Le profil des acides gras a été établi selon la procédure décrite dans la méthode Ce 1h-05 de l'AOCS. Cette procédure comporte la correction des aires des pics d'EMAG selon la réponse à la détection à ionisation de flamme et la conversion des aires de pics corrigées en quantités de mg par rapport à l'étalon interne. Par la suite, les poids ont été convertis en équivalents de TG et en équivalents d'acides gras libres. La somme des équivalents de TG donne la teneur totale en graisses. Les acides gras trans et les acides gras saturés sont calculés en tant que pourcentage des acides gras totaux.

Assurance de la qualité

Compétence du personnel : Les analyses d'échantillons ont été réalisées aux laboratoires régionaux de la Direction générale des produits de santé et des aliments à Toronto (Ontario) et à Winnipeg (Manitoba) sous la supervision du Dr Nimal Ratnayake. Avant l'analyse des échantillons, les analystes des deux laboratoires avaient suivi une formation de laboratoire d'une durée de deux jours sur l'analyse des acides gras trans donnée par le Dr Ratnayake (en janvier 2005, à Ottawa).

Vérification de la compétence des analystes : Depuis 2005, le laboratoire de Toronto participe régulièrement au Laboratory Check Sample Program on Trans Fatty Acids (programme de vérification de la compétence des laboratoires en ce qui concerne l'analyse des acides gras trans) de l'AOCS. Le laboratoire de Winnipeg a participé au même programme en 2005 et en 2006. Les deux laboratoires ont obtenu des résultats exceptionnels, leur écart réduit se situant entre -2 et 2 pour tous les acides gras trans.

Assurance de la qualité

Laboratoire de Winnipeg : Un échantillon bien caractérisé de margarine a été extrait et analysé avec chaque série d'échantillons. L'extraction des graisses de l'échantillon de margarine a donné des résultats reproductibles tout au long de l'enquête (moyenne des graisses extractibles = 75,6 %, écart-type résiduel (ÉTR) = 6,6 %, n = 24). La variabilité des acides gras trans totaux (mesurés en tant que % des acides gras totaux) était aussi très faible (moyenne des acides gras trans totaux  = 17,2 %, ÉTR = 2,3 %, n = 24).

Laboratoire de Toronto : L'échantillon de vérification no 5 de l'AOCS (huile de soja partiellement hydrogénée) a été analysé avec chaque série de cinq échantillons. De plus, un échantillon a été analysé en double dans chaque série de cinq échantillons.

Références

1. AOAC Official Method 996.06. Fat (Total, Saturated, and Unsaturated) in foods, hydrolytic extraction gas chromatographic method, Revised 2001. In: Official Methods of Analysis of AOAC International 18^th Edition (Horwitz, W, ed.).
2. Determination of cis-, trans-, Saturated, Monounsaturated and Polyunsaturated Fatty Acids in Vegetable or Non-Ruminant Animal Oils and Fats by Capillary GLC Method, Official and Recommended Practices of the AOCS, 5th edn., Revisions and Corrections, AOCS Press, Champaign, Official Method Ce 1h-05, approved 2005, revised 2005.
3. Ratnayake WMN, Pelletier G (1992) Positional and Geometrical Isomers of Linoleic Acid in Partially Hydrogenated Oils. J Am Oil Chem Soc 69:95-105 (1992).
4. Ratnayake WMN. Overview of Methods for the Determination of trans Fatty Acids by Gas Chromatography, Silver-Ion Thin-Layer Chromatography, Silver-Ion Liquid Chromatography, and Gas Chromatography/Mass Spectrometry.
5. Ratnayake WMN, Hansen SL, Kennedy MP (2006) Evaluation of the CP-Sil 88 and SP-2560 Columns Used in the Recently Approved AOCS Official Method Ce 1h-05: Determination of cis-, trans-m Saturated, Monounsaturated, and Polyunsaturated Fatty Acids in Vegetable or Non-ruminant Animal Oils and Fats by Capillary GLC Method. J Am Oil Chem Soc 83:475-488.