Information sur les aliments nouveaux - Lignée de canola Cibus 5715 (tolérant les herbicides à l'imidazolinone et à base de sulfonylurée)

Santé Canada a avisé Cibus US SARL, une société affiliée à Cibus Canada inc., qu'il ne s'oppose pas à l'utilisation de la lignée de canola Cibus 5715 à des fins alimentaires. Le Ministère a réalisé une évaluation approfondie de cette variété de canola conformément à ses Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux. Ces dernières sont fondées sur les principes admis internationalement de l'établissement de l'innocuité d'aliments comportant des caractères nouveaux.

Contexte

Le texte qui suit résume l'avis remis par Cibus US SARL à Santé Canada ainsi que l'évaluation qu'en a fait le Ministère. Il ne contient aucun renseignement commercial confidentiel.

1. Introduction

Cibus US SARL a mis au point une lignée de canola ayant, par rapport aux variétés traditionnelles, une tolérance accrue aux herbicides à l'imidazolinone et à base de sulfonylurée. Cette lignée est caractérisée par une mutation d'un nucléotide spécifique sur les gènes AHAS1 et AHAS3 localisés respectivement sur les génomes C et A du colza - Brassica napus (BnAHAS1C et BnAHA3A). Les gènes BnAHAS1C et BnAHAS3A codent tous les deux pour la sous-unité protéique (c.-à-d., un monomère) d'une enzyme acétohydroxyacide synthase (AHAS) qui agit à la manière d'un homodimère constitué de deux sous-unités provenant d'un gène ou de l'autre, ou à la manière d'un hétérodimère constitué d'une sous-unité provenant de chacun des deux gènes, respectivement. L'enzyme AHAS participe à la biosynthèse des acides aminés à chaîne ramifiée, dont à celles de la leucine, de l'isoleucine et de la valine. Les herbicides à l'imidazolinone et à base de sulfonylurée se lient aux sites actifs de l'enzyme AHAS, empêchant ainsi la synthèse de ces acides aminés essentiels.). La mutation de l'unique nucléotide  dans chaque sous-unité de l'enzyme AHAS donne lieu à des modifications conformationnelles de l'enzyme, diminuant l'affinité des herbicides à l'imidazolinone et à base de sulfonylurée, conférant ainsi au canola une tolérance à ces herbicides.

Santé Canada a évalué des mutations semblables dans les lignées de canola commercialisées sous le nom de Smart^MD (canola tolérant l'imidazolinone) et  fabriquées par Pioneer Hi-Bred International inc. (Santé Canada, 1995).

Cette évaluation de l'innocuité, dont les scientifiques de la Direction des aliments se sont chargés, a été réalisée conformément aux Lignes directrices relatives à l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux de Santé Canada. Ces dernières sont fondées sur les démarches visant l'harmonisation avec les directives établies par d'autres autorités réglementaires et reflètent les documents d'orientation internationaux dans ce domaine (p. ex., du Codex Alimentarius). L'évaluation a porté sur la façon dont la lignée de canola Cibus 5715 a été mise au point, la comparaison entre la composition et la qualité nutritionnelles de cette lignée par rapport à celles des variétés traditionnelles et, enfin, sa toxicité et son allergénicité éventuelles. Cibus US SARL a présenté des données démontrant que la lignée de canola Cibus 5715 est tout aussi sûre que les variétés de canola traditionnel utilisées dans les aliments au Canada et que leur qualité nutritionnelle est la même.

La Direction des aliments assume la responsabilité imposée par la loi de l'évaluation préalable à la mise en marché des aliments et des ingrédients alimentaires nouveaux, et la responsabilité en question est exposée en détail dans le Règlement sur les aliments et drogues (au titre 28). La lignée de canola Cibus 5715 est considérée comme un aliment nouveau selon la partie suivante de sa définition :

« c) aliment dérivé d'un végétal, d'un animal ou d'un micro-organisme qui, ayant été modifié génétiquement, selon le cas :

1. présente des caractères qui n'avaient pas été observés auparavant […]. »

2. Mise au point de la plante modifiée

Le requérant a produit la description des méthodes appliquées à la mise au point de la lignée de canola Cibus 5715 et les données en matière de biologie moléculaire caractérisant la modification génétique entraînant la tolérance accrue aux herbicides à l'imidazolinone et à base de sulfonylurée.

La lignée de canola Cibus 5715 est issue du croisement de la lignée de canola Cibus BnALS-57 (qui entraîne  l'unique nucléotide dans le gène BnAHAS1C) et de la variété de canola SP Cougar CL vendue par CLEARFIELD (qui entraîne le même nucléotide dans le gène BnAHAS3A). D'autres croisements et rétrocroisements ont été effectués pour renforcer la lignée de canola désirée (c.-à-d., la lignée de canola Cibus 5715). Avec le caractère de tolérance aux herbicides exprimé dans la génération F4, le séquençage de l'ADN a été utilisé pour confirmer l'homozygosité de la mutation unique du nucléotide à la fois dans le gène BnAHAS1C et dans le gène BnAHAS3A. De plus, les végétaux issus d'une génération de sélection avancée de la lignée de canola Cibus 5715 ont présenté une tolérance constante aux herbicides à l'imidazolinone et à base de sulfonylurée, ce qui confirme sur le plan phénotypique la stabilité de l'hérédité du caractère.

Puisqu'elle entraîne la  mutation de l'unique nucléotide dans le gène BnAHAS1C, la lignée de canola Cibus BnALS-57 a été choisie comme variante mutante de la lignée parentale de type sauvage BN2. Les espèces mutantes de la lignée BN2 ont été créées grâce à la technologie RTDSMC (Rapid Trait Development System), une méthode de mutagenèse dirigée à l'aide d'un oligonucléotide. Une étape critique du protocole RTDS consiste en l'application de techniques de culture cellulaire pour créer des cellules végétales plus prédisposées à la mutagenèse. Les protoplastes de la lignée BN2 ont été soumis à la technologie RTDS puis placés dans un milieu de culture contenant de l'imazéthapyr (un herbicide à l'imidazolinone). Des cals en phase de croissance active ont été isolés à partir d'un échantillon de contrôle de cellules brunâtres. Le génotype de ces cals tolérant les herbicides a été établi et la présence de l'unique nucléotide dans le gène BnAHAS1C a été confirmée. Le requérant a émis l'hypothèse selon laquelle l'unique nucléotide avait été causée par une variation somaclonale qui s'était produite pendant le processus de culture de tissus et n'était pas attribuable à l'oligonucléotide spécifique utilisé dans le cadre du protocole RTDS. Par la suite, le mutant sélectionné a été régénéré pour produire la lignée de canola désignée comme BnALS-57. À la suite de cette régénération, le séquençage complet du gène BnAHAS1C et celui du gène BnAHAS3A a été effectué, ce qui a permis de confirmer que la seule mutation opérée (par rapport à ces gènes de la lignée de type sauvage BN2) était l'unique nucléotide dans le gène BnAHAS1C. Aucune modification n'a été observée dans les régions promotrices ou dans d'autres sites qui pourraient influer sur l'expression du gène endogène. Cette observation a été confirmée par le séquençage d'une région constituée de 2 500 paires de base (pb) en amont du gèneBnAHAS1C dont il a été déterminé qu'il est identique au gène portant le numéro d'entrée Z11524 dans GenBank.

3. Caractérisation de la plante modifiée

Comme mentionné précédemment, la lignée de canola Cibus 5715 est issue du croisement de la lignée de canola Cibus BnALS-57 et de la variété de canola SP Cougar CL vendue parCLEARFIELD. Puisque la mutation nucléotidique ne constitue que la modification d'un seul nucléotide qui entraîne la substitution d'un seul acide aminé (c.-à-d., W574L), le séquençage de l'ADN du gène BnAHAS1C et de celui du gène BnAHAS3A dans la lignée de canola Cibus 5715 a servi à confirmer l'homozygosité de la  seule mutation nucléotidique dans les deux gènes.

La tolérance constante aux herbicides à l'imidazolinone et à base de sulfonylurée observée dans une génération de sélection avancée de la lignée de canola Cibus 5715 a démontré la stabilité de de la  seule mutation nucléotidique dans ces deux gènes.

4. Information sur le produit

La lignée de canola Cibus 5715 se distingue de  sa contrepartie conventionnelle par la présence de la mutation   de l'unique nucléotide dans les gènes BnAHAS1C et BnAHAS3A. Ces deux gènes codent pour une sous-unité protéique d'une enzyme AHAS qui agit à la manière d'un dimère. L'enzyme AHAS participe à la biosynthèse des acides aminés à chaîne ramifiée, dont la leucine, l'isoleucine et la valine. L'enzyme AHAS native est sensible aux herbicides à l'imidazolinone et à base de sulfonylurée qui peuvent inhiber l'activité enzymatique. La mutation de l'unique nucléotide dans les gènes BnAHAS1C et BnAHAS3A entraîne la substitution d'un seul acide aminé dans chaque sous-unité protéique ce qui provoque des modifications conformationnelles de l'enzyme lui conférant la tolérance aux herbicides à l'imidazolinone et à base de sulfonylurée.

5. Exposition alimentaire

Il est prévu que la lignée de canola Cibus 5715 soit utilisée aux mêmes fins que les variétés de canola traditionnel. Avec le lancement de cette lignée, le requérant ne prévoit pas de modification importante de la façon dont le canola est utilisé dans l'alimentation.

6. Nutrition

Des essais au champ, en conditions de confinement, ont été réalisés au Canada en 2011 pour comparer la lignée de canola Cibus 5715 et les hybrides contenant la  même mutation de l'unique nucléotide à plusieurs hybrides de canola cultivés commercialement (ne portant pas de mutant). Aux fins d'évaluation nutritive, la lignée commerciale de canola BY 5525 a servi de lignée de comparaison puisqu'il s'agit d'une lignée autorisée cultivée à échelle commerciale sur plusieurs acres au Canada et qu'elle représente un canola dont la qualité correspond actuellement à celle attendue des variétés commerciales. Cette variété a également été choisie pour son homologie avec la lignée de canola Cibus 5715 puisqu'elle aussi est caractérisée par la mutation de l'unique nucléotide dans le gène BnAHAS3A. Les données sur la composition proviennent de six emplacements canadiens dans les régions de culture du canola du Manitoba et de la Saskatchewan.

Les analytes mesurés et évalués provenant de l'huile extraite de la lignée de canola Cibus 5715 ainsi que des variétés de référence BY 5525 étaient les suivants : acides gras (palmitique, palmitoléique, stéarique, oléique, linoléique, linolénique, arachidique, eicosénoïque, eicosadiénoïque, béhénique, érucique, lignocérique, nervonique). Les analytes mesurés et évalués provenant du tourteau déshuilé de la lignée de canola Cibus 5715 ainsi que des variétés de référence BY 5525 étaient les suivants : protéines, huile, cendre, fibre brute, fibre au détergent acide (FDA), cellulose au détergent neutre (NDF), glucosinolates (composé aliphatique, glucosinolate de méthylthiobutényle [MSGL]), indole et glucosinolates totaux), calcium. phosphore et acides aminés (alanine, arginine, acide aspartique, cystéine, acide glutamique, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, méthionine, phénylalanine, proline, sérine, thréonine, tyrosine, valine). Les analytes mesurés et évalués provenant du tourteau déshuilé de la lignée de canola Cibus 5715 ainsi que des variétés de référence BY 5525 étaient les suivants : acides gras (palmitique, palmitoléique, stéarique, oléique, linoléique, linolénique, arachidique, eicosénoïque, eicosadiénoïque, béhénique, érucique, lignocérique, nervonique), acide phytique et inhibiteurs de la trypsine.

Les résultats démontrent que plusieurs analytes (13 de 57) de la lignée de canola Cibus 5715 présentaient une différence statistiquement significative par rapport à ceux de la variété de référence BY 5525. Toutefois, ces différences ont été estimées acceptables puisque dans la lignée de canola Cibus 5715, la teneur en ces analytes se trouvait dans les plages indiquées dans le document consensuel sur le canola publié par l'Organisation de coopération et de développement économiques (OCDE) en 2011. En ce qui concerne les glucosinolates, leur teneur est beaucoup plus faible dans la lignée de canola Cibus 5715 que celles indiquées dans le document, ce qui signifie qu'elles auraient probablement une incidence positive sur l'innocuité nutritionnelle.

Dans le cadre des évaluations nutritives réalisées sur la lignée 5715, la variété BY 5525 a constitué la principale lignée de comparaison. De plus, la comparaison avec la lignée parentale progénitrice BN2 a été intégrée au document en vertu des analyses des échantillons des graines récoltées à partir d'un emplacement d'un des essais au champ à Langdon dans le Dakota du Nord. Cet emplacement se caractérise par la même association des sols que celle du sud du Manitoba ainsi qu'il est soumis à la même situation météorologique. Ainsi, la supposition voulant qu'elle devrait donner des résultats à l'image de son rendement dans le sol des Prairies canadiennes au Manitoba est plausible. La lignée soumise à cette analyse possédait le génotype BN2 (c.-à-d., la lignée non parentale de la lignée de canola Cibus BnALS-57) tout comme la composante femelle de la variété hybride. Les lignées de canola Cibus 5715 et BN2 ont été récoltées sur trois parcelles comparatives puis analysées individuellement pour en obtenir la composition nutritionnelle.

Les analytes mesurés et évalués provenant de l'huile extraite de la lignée de canola Cibus 5715 ainsi que des variétés de référence BN2 étaient les suivants : acides gras (palmitique, palmitoléique, stéarique, oléique, linoléique, linolénique, arachidique, eicosénoïque, eicosadiénoïque, béhénique, érucique, lignocérique, nervonique). Les analytes mesurés et évalués provenant du tourteau déshuilé de la lignée de canola Cibus 5715 ainsi que des variétés de référence BN2 étaient les suivants : acides aminés (alanine, arginine, acide aspartique, cystéine, acide glutamique, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, méthionine, phénylalanine, proline, sérine, thréonine, tyrosine, valine et tryptophane). Les analytes mesurés et évalués provenant du tourteau déshuilé de la lignée de canola Cibus 5715 ainsi que des variétés de référence BN2 étaient les suivants : protéines, huile, cendre, fibre brute, fibre au détergent acide (FDA), cellulose au détergent neutre (NDF), glucosinolates (composé aliphatique, glucosinolate de méthylthiobutényle [MSGL]), indole et glucosinolates totaux), calcium. phosphore.

Les résultats démontrent que plusieurs analytes (19 de 43) de la lignée de canola Cibus 5715 présentaient une différence statistiquement significative par rapport à la variété de référence BN2. Toutefois, ces différences ont été estimées acceptables puisque dans la lignée de canola Cibus 5715, la teneur en ces analytes se trouvait dans les plages publiées dans au moins un document consensuel (2001, 2011) sur le canola produit par l'Organisation de coopération et de développement économiques (OCDE). Sinon, l'incidence de la différence sur les apports alimentaires et la possibilité qu'elle soit préoccupante pour la santé se sont révélées négligeables, ou encore, en ce qui concerne les glucosinolates, les valeurs sont beaucoup plus faibles dans la lignée de canola Cibus 5715 que celles indiquées dans le document, ce qui signifie qu'ils auraient probablement une incidence positive sur l'innocuité nutritionnelle.

Selon les renseignements fournis, le requérant a prouvé que la composition de la lignée de canola Cibus 5715 est fondamentalement équivalente à celle de la lignée parentale progénitrice BN2 et de la lignée commerciale de canola BY 5525.

7. Chimie et toxicologie

La  mutation de l'unique nucléotide dans le gène BnAHAS3A  a précédemment été incorporée dans d'autres lignées de canola (SmartMD et ClearfieldMD) qui ont été approuvées par Santé Canada. Santé Canada a approuvé ces lignées de canola pour utilisation alimentaire en vertu d'une absence d'homologie avec les toxines protéiques connues, preuve que la protéine mutante est thermolabile et qu'elle est dégradée rapidement dans le liquide gastrique simulé (LGS) ainsi que de l'exposition négligeable prévue par la consommation de l'huile de canola. Puisque la  mutation de l'unique nucléotide dans le gène BnAHAS1C, semblable à 99,7 % au gène BnAHAS3A, constitue le caractère nouveau dans la lignée de canola Cibus 5715, il est peu probable que le potentiel de toxicité soit nettement différent entre les protéines AHAS exprimées par ces deux gènes.

Le requérant affirme que l'enzyme AHAS ne fait pas partie des toxines connues et qu'aucune donnée scientifique ne démontre que la présence de la mutation de l'unique nucléotide peut modifier ce fait. Une analyse bio-informatique a été réalisée à l'aide de la base de données des protéines GenBank (consultée en avril 2013) afin de comparer les protéines AHAS de type sauvage et celles issues du gène BnAHAS1C aux toxines connues. Au total, 689 560 séquences ont été examinées. En vertu du critère de recherche utilisé, aucune autre correspondance significative pour la protéine mutante du gène BnAHAS1C n'a été obtenue qui ne l'avait pas déjà été quand cette même base de données avait été consultée pour la séquence du BnAHAS1C de type sauvage. Au total, 56 correspondances ont été établies, lesquelles correspondent toutes à des enzymes dépendantes de la thiamine pyrophosphatase. Ces enzymes sont apparentées à l'enzyme AHAS et jouent un rôle de premier plan dans le métabolisme énergétique. En consultant la documentation scientifique évaluée par des pairs et à la connaissance du requérant, il n'existe aucune preuve que ces enzymes et les produits qui en découlent soient toxiques.

Le requérant a présenté des études visant à déterminer si la protéine mutante (BnAHAS1C) est dégradée dans le LGS et dénaturée à des températures élevées. Les résultats de l'étude avec le LGS ont été jugés non valables en raison des difficultés d'interprétation de la méthode utilisée et des résultats obtenus. L'étude de thermolabilité a permis de démontrer que la mutation de l'unique nucléotide n'influe pas sur la sensibilité de la protéine à l'inactivation thermique puisque l'activité enzymatique des protéines de la lignée de type sauvage et de celle  de la proteine mutante s'est trouvée grandement diminuée après leur exposition à des températures élevées semblables à celles observées dans le traitement de l'huile de canola. Toutefois, la  validité de ces études n'a pu être confirmée parce que le requérant n'a pas communiqué l'information servant à corroborer l'équivalence entre les protéines d'origine microbienne utilisées dans le cadre de ces études et les protéines d'origine végétale. Néanmoins, l'huile contient des quantités négligeables de la protéine qui résultent de la transformation chimique exhaustive, du processus de filtration ainsi que des températures élevées nécessaires à sa production.

8. Allergénicité

Le requérant a réalisé une recherche d'homologie in silico dans les séquences d'acides aminés entre les protéines mutantes  AHAS et les allergènes qui figurent dans la base de données Allermatch. Aucune correspondance n'a été établie à l'aide des critères de recherche de huit acides aminés contigus présentant une identité supérieure à 35 %. De plus, aucune correspondance n'a pu être établie à l'aide des mêmes critères avec les protéines AHAS de type sauvage.

Aucun ADN étranger n'a été utilisé dans la mise au point de la lignée de canola Cibus 5715 qui, conséquemment, ne contient aucune source supplémentaire d'allergènes potentiels.

Avant de parvenir à l'état d'huile, le canola est fortement transformé et il est soumis à de nombreux traitements. Le chauffage, l'extraction au solvant, le toastage, la décoloration (c.-à-d., filtration par l'argile) et la distillation par entraînement à la vapeur (c.-à-d., désodorisation) comptent au nombre de ces traitements. De façon générale, puisque ces processus dénaturent et suppriment les protéines, l'huile de canola produite constitue une source négligeable de protéines et ne susciterait pas de préoccupations en matière d'allergies.

Conclusion

L'examen qu'a réalisé Santé Canada de l'information présentée à l'appui de la consommation alimentaire de la lignée canola Cibus 5715 ne suscite pas de préoccupations sur le plan de l'innocuité. De l'avis de Santé Canada, les aliments dérivés de cette lignée de canola ne comportent pas davantage de danger et sont tout aussi nutritifs que les variétés de canola actuellement sur le marché.

L'opinion formulée par Santé Canada n'a trait qu'à l'utilisation alimentaire de la lignée de canola Cibus 5715. Les questions relatives à son utilisation dans l'alimentation animale ont été étudiées séparément conformément aux processus réglementaires mis en œuvre par l'Agence canadienne d'inspection des aliments (ACIA). L'ACIA a évalué l'information communiquée sur l'innocuité de la lignée de canola Cibus 5715 pour la santé environnementale, animale et humaine dans la perspective de son utilisation dans l'alimentation animale. À partir de cette évaluation, l'ACIA a conclu qu'elle ne suscitait pas de préoccupations en matière d'innocuité, que ce soit sur le plan de l'environnement ou de l'alimentation animale. Ce point de vue est valable pour les produits alimentaires dérivés de la lignée de canola Cibus 5715 destinés à la vente à des fins de consommation humaine et animale.

Il incombe au fabricant ou à l'importateur de veiller en tout temps à ce que leurs produits soient conformes à toutes les exigences légales et réglementaires. Dans le but de veiller à l'innocuité et à l'intégrité de tous les aliments offerts sur le marché canadien, tout renseignement inédit relatif à ces produits indiquant une incidence éventuelle sur la santé et la sécurité doit être communiqué à Santé Canada aux fins d'un examen. La vente d'un aliment qui comporte un risque pour la santé des consommateurs enfreindrait les dispositions de la Loi sur les aliments et drogues.

Le présent document sur les aliments nouveaux résume l'avis sur le produit visé par la Direction des aliments, Direction générale des produits de santé et des aliments, Santé Canada. Cet avis est fondé sur l'analyse détaillée des renseignements fournis par le requérant, conformément aux Lignes directrices relatives à l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux.

Pour obtenir plus de renseignements, veuillez communiquer avec :

Section des aliments nouveaux
Direction des aliments
Direction générale des produits de santé et des aliments
Santé Canada, IA 2204A1
251, promenade Sir Frederick Banting
Ottawa (Ontario) K1A 0K9
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